細(xì)胞吹打

細(xì)胞培養(yǎng)是個技術(shù)活，其中各個步驟的操作都需十分謹(jǐn)慎規(guī)范，否則稍有不慎就要面臨“再來一次”的風(fēng)險。就拿吹打細(xì)胞來講，操作起來并不復(fù)雜，但如果吹打技巧掌握不好，細(xì)胞很容易遭受機(jī)械損傷和剪切力影響，從而導(dǎo)致細(xì)胞受損嚴(yán)重、狀態(tài)變差或者直接死亡。

1、機(jī)械損傷&剪切力

機(jī)械損傷主要是指槍頭或者吸管的刮擦、細(xì)胞間碰撞導(dǎo)致的細(xì)胞損傷。如果要減少這部分損傷，首先應(yīng)該盡量減小吹打力度，力度只要保證能夠吹下吹散細(xì)胞就行。大部分懸浮細(xì)胞不需要很大力度吹打即會散開，而貼壁細(xì)胞一定要消化到細(xì)胞可以輕輕吹下再終止消化。消化不完全就暴力吹下的細(xì)胞往往狀態(tài)都不會太好。

剪切力是指物體橫截面收到外力影響，沿外力方向相對移動的現(xiàn)象，這個外力就叫做剪切力。如果培養(yǎng)基里有很多氣泡，細(xì)胞處在氣泡與培養(yǎng)基之間，當(dāng)氣泡破碎時，細(xì)胞瞬間會受到強(qiáng)大的剪切力影響從而導(dǎo)致細(xì)胞碎裂。

那么我們在進(jìn)行細(xì)胞吹打的時候應(yīng)該選擇哪種工具、需要掌握怎樣的技巧呢？

2、吹打工具的選擇

其實(shí)在吹打工具的選擇上會根據(jù)實(shí)驗(yàn)人員的研究對象、使用耗材的不同以及使用習(xí)慣而定。

在使用移液槍進(jìn)行細(xì)胞吹打時，因?yàn)闃尶谳^細(xì)，且沖擊力大，可以把貼的很牢的細(xì)胞吹下來，把細(xì)胞吹成懸液的時候，用槍也會吸得更均勻。不過有的時候貼的很牢的細(xì)胞可能是消化不夠，這種情況下即使用槍可以把細(xì)胞吹打下來，對于細(xì)胞的損傷作用也是非常大的。在用槍進(jìn)行吹打的時候要格外小心，如果吸得太快，槍頭沒放好位置，可能會一下把液體吸得超過了槍頭弄到槍里面，從而導(dǎo)致污染。其次是注意槍頭刮擦的問題，槍頭與細(xì)胞層接觸甚至研磨會導(dǎo)致細(xì)胞直接死亡。槍頭直接接觸瓶底不僅會刮傷細(xì)胞，還可能劃傷瓶底產(chǎn)生劃痕，有劃痕的這部分是很難再有細(xì)胞生長的。

槍比較適合用于小的瓶或皿，大瓶大皿的話由于液體多，面積體積大，用槍操作很不方便。槍的話一般是在35mm的皿、孔板培養(yǎng)的細(xì)胞培養(yǎng)中采用的比較多，此時培養(yǎng)的面積比較小通常無法用移液管進(jìn)行操作。而像60mm的皿用5ml移液管操作還是比較方便的。

巴氏吸管因?yàn)楣茏颖容^軟，相對移液管而言吹打力度更溫和些，對于有些細(xì)胞來說可能比較難以吹打成細(xì)胞懸液。另外3ml巴氏管在吹打比較大體積的細(xì)胞懸液（比如10ml）時因?yàn)轶w積相差太大，也增加了吹打成單細(xì)胞或者細(xì)胞懸液的難度。

3、避免氣泡產(chǎn)生

但不管是移液管、槍、巴氏吸管吹打細(xì)胞時，都要盡量避免產(chǎn)生氣泡，氣泡產(chǎn)生一方面增加了污染的概率，另一方面氣泡破了后的瞬間對細(xì)胞產(chǎn)生的剪切力較大，會對細(xì)胞造成傷害。吹打時掌握合適力度更容易控制培養(yǎng)基流速，避免渦流產(chǎn)生氣泡。吹打用的培養(yǎng)基不能太少，否則在吹打時容易打入空氣混入氣泡。

4、安進(jìn)特——細(xì)胞吹打相關(guān)耗材

安進(jìn)特移液吸頭

安進(jìn)特巴氏吸管

安進(jìn)特血清移液管